SRM972a維生素-D標準物質(zhì)(美國NIST)旨在用作對確定人血清中維生素-D代謝物的物質(zhì)濃度的方法進(jìn)行嚴格評估的準確度控制。SRM972a維生素-D標準物質(zhì)還可用作質(zhì)量保證工具，用于為這些成分的內部控制材料分配值。SRM 972a由四個(gè)小瓶(1到4級)冷凍血清組成，其中含有不同濃度的25-羥基維生素-D和24r，25-二羥基維生素-D3。

測量血清中的總25(OH)D濃度，即25-羥基維生素-D2和25-羥基維生素，D3[25(OH)D3]的總和，通常被認為是維生素-D狀態(tài)的可靠指標.。3-環(huán)氧-25-羥基維生素-D3[3-epi-25(OH)D3]的濃度通常不包括在總25(OH)D中，但該代謝物對某些維生素-D代謝物測定構成潛在的測量干擾24r，25-二羥基維生素-D3的測量血清中的含量被認為是分解代謝的標志物和腎臟疾病的指標。每瓶SRM 972a含有大約1 mL血清。

SRM972a維生素-D標準物質(zhì)(美國NIST)的四個(gè)水平中的每一個(gè)都以25(OH)D的特定目標水平制備。雖然某些測量方法可能適用SRM 972a的四個(gè)級別中的每一個(gè)，但要認識到某些方法可能不適用于某些級別。個(gè)人用戶(hù)將需要評估哪個(gè)級別或哪些級別極適合他們的特定需求。

SRM972a維生素-D標準物質(zhì)(美國NIST)中 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3 濃度的賦值基于 NIST (ID) 兩種分析方法提供的結果的組合-LC-MS 和 ID-LC-MS/MS）以及來(lái)自 CDC 的兩個(gè) ID-LC-MS/MS 分析程序。 24R、25(OH)2D3 濃度的賦值基于 NIST 的 ID-LC-MS/MS 結果。通過(guò) ID-LC-MS (NIST) 測量 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3：血清 (450 mg) 和含有 2 H6-25( OH)D3、2 H3-25(OH)D2 和 2 H3-3-epi-25(OH)D3 在玻璃管中混合，沉淀蛋白質(zhì)，將代謝物萃取到己烷中兩次。合并己烷相并在氮氣下在40°C蒸發(fā)至干。殘留物用甲醇復溶，渦流混合。使用 LC-MS 和 (1) Ascentis Express F5 五氟苯丙基色譜柱 (Supelco, Bellefonte, PA) 和 (2) Zorbax SB-CN 氰丙基固定相色譜柱 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) 分析提取物。五氟苯丙基色譜柱的分析在等度流動(dòng)相為 26% 水和 74% 甲醇，流速為 0.8 mL/min。所有溶劑組成均以百分比表示體積分數。柱溫保持在 15 °C。在運行結束時(shí)將梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脫保留的基質(zhì)成分。在等度條件下對氰丙基色譜柱進(jìn)行分析，流動(dòng)相為 33% 水和 67% 甲醇（SRM 972a 的 1、2 和 4 級）或 34% 水和 66% 甲醇（3 級），流速為1.0 毫升/分鐘。在運行結束時(shí)將梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脫保留的基質(zhì)成分。柱溫保持在 45 °C。

表1提供了25(OH)D3、25(OH)D2、3-epi-25(OH)D3和24r、25(OH)2D3的認證值.認證值是一個(gè)值對其準確性的信心最高，因為所有已知或可疑的偏差來(lái)源都已被調查或考慮在內[1]。認證值25(OH)D3、25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3是基于同位素稀釋液相色譜質(zhì)譜(ID-LC-MS)[2]和同位素稀釋液的結果一致色譜串聯(lián)質(zhì)譜(ID-LC-MS/MS)[3]在NIST執行的程序，以及在佐治亞州亞特蘭大的疾病控制和預防中心(CDC)執行的兩種不同的ID-LC-MS/MS程序[4.5]。24r、25(OH)2D3的認證值基于使用ID-LC-MS/MS進(jìn)行的參考測量程序的結果NIST[6]。NIST和CDCID-LC-MS/MS方法被檢驗醫學(xué)可追溯性聯(lián)合委員會(huì )(JCTLM)[7，8]認定為高階參考測量程序。

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表2提供了25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的參考值。參考值是未經(jīng)認證的值，是根據現有數據對真實(shí)值的最佳估計;然而，這些值不符合NIST的認證標準，并且提供了相關(guān)的不確定性，這些不確定性可能僅反映測量精度，可能不包括所有不確定性來(lái)源，或者可能反映多種分析方法之間缺乏足夠的統計一致性[1]。25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的參考值基于在NIST和ID-LC-執行的ID-LC-MS和ID-LC-MS/MS程序結果的一致性。CDC提供的MS/MS.結果。

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