SRM2374外部RNA控制的DNA序列庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)品NIST旨在用作使用體外轉(zhuǎn)錄 (IVT) 進(jìn)行核糖核酸 (RNA) 對(duì)照合成的模板。這些 RNA 對(duì)照旨在用作外部對(duì)照或“加標(biāo)"對(duì)照，通過(guò)對(duì)基因表達(dá)測(cè)量的技術(shù)性能進(jìn)行定量評(píng)估來(lái)支持基因表達(dá)測(cè)定的可信度。一個(gè) SRM 單元包含 96 個(gè)不同的 0.5 mL 聚丙烯管，其中通過(guò)吸光度 (A260) 測(cè)量，每個(gè)脫水質(zhì)粒脫氧核糖核酸 (DNA) 約為 10 µg。

每個(gè)試管都含有質(zhì)粒 DNA，其具有*的模板序列，用于不同的外部 RNA 對(duì)照。這些控制是與外部 RNA 控制聯(lián)盟 (ERCC) 合作開(kāi)發(fā)的。

這些模板可以很容易地用于制作 RNA 控制（參見(jiàn)圖 1）。根據(jù)轉(zhuǎn)錄的鏈，對(duì)照將模擬“有義"或“反義"真核信使 RNA (mRNA)。當(dāng)用于制造有義對(duì)照 RNA 時(shí)，每個(gè)對(duì)照在 3' 端將有一個(gè)標(biāo)稱的 24 個(gè)核苷酸 (nt) 多聚腺苷酸 (polyA) 片段。由它們產(chǎn)生的 DNA 模板和 RNA 轉(zhuǎn)錄本在圖 2 和圖 3 中進(jìn)行了注釋和描述。對(duì)照序列范圍從 273 nt 到 2022 nt，GC 分?jǐn)?shù) (1) 有兩種群體分布，一種以 35% GC 為中心，另一種以 47% 為中心。

認(rèn)證特性：

SRM2374外部RNA控制的DNA序列庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)品NIST 的認(rèn)證特性是 ERCC 對(duì)照插入片段的 DNA 序列。核苷酸身份使用國(guó)際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì) (IUPAC) 核苷酸符號(hào)進(jìn)行編碼，包括序列中幾個(gè)堿基的歧義代碼。表 2 包括，對(duì)于每個(gè)組件，對(duì)包含國(guó)家生物信息中心 (NCBI) GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中認(rèn)證序列的記錄的引用。經(jīng)認(rèn)證的序列可從 NIST 以 FASTA 格式的數(shù)據(jù)文件 [1] 獲得，與此證書相關(guān)聯(lián)。

由于被測(cè)量是標(biāo)稱屬性（核苷酸序列）的值，因此不能使用符合 JCGM GUM [2] 的測(cè)量不確定度的常規(guī)評(píng)估和表達(dá)。相反，與每個(gè)核苷酸相關(guān)的不確定性以表示對(duì)規(guī)定值的信念強(qiáng)度的順序標(biāo)度表示（0 = 最有信心，1 = 非常有信心，2 = 有信心，3 = 模棱兩可）。與序數(shù)尺度水平相關(guān)的序列數(shù)據(jù)的特征在表 1 中進(jìn)行了描述（參見(jiàn)“Certified Properties Confidence Estimates"）。這些置信度估計(jì)值可在隨附的 FASTA 格式文件 [1] 中獲得。

在缺乏*發(fā)展的身份計(jì)量學(xué)（目前的事態(tài)）的情況下，一種務(wù)實(shí)的前進(jìn)方式是將這些 DNA 序列視為從文庫(kù)轉(zhuǎn)錄的 RNA 對(duì)照的“身份可比性"的來(lái)源。